Szám: SK_000002_H
Szerző: Jackuliak, Ondrej
Cím: A Fomes fomentarius taplógomba hozzájárulása a polifenoloxidáz keletkezésének növekedéséhez és az enzim elkülönítése
Forrás: Drevársky Výskum, 1980. XXV. Évfolyam, 2-3. kötet, 83 - 89. oldal, Štátny drevársky výskumný ústav (ŠDVU), ALFA, Bratislava 1981.
Lásd az eredeti cikket:
http://library.envifor.eu:8282/greenstone/collect/PDF/SK_000002.pdf
Kulcs szavak: ligninnel táplálkozó gombák, lakkáz, gélszűréses kromatográfia, polifenil oxidázok, oxidatív foszforilálás
Az eredeti rezümé nem lektorált fordítása:
Bebizonyosodott, hogy a Polyporus fajba tartozó farontó gombák által termelt lakkáz mennyiségére a tirozin és egyéb anyagok vannak hatással. Megállapították, hogy ha a tápoldathoz fenolikus anyagokat adunk, növekszik a lakkáz képződés. A tirozin kiváltja a lakkáz képződést. Hasonló hatást tapasztaltak a 2,5-xilidin és a p-krezol alkalmazása esetén is. A 2,5-xilidin ösztönző hatását használták ki a Polyporus versicolor gomba esetében a polifenol oxidáz elkülönítésére az enzimek tanulmányozása során. A lakkáz képződés növekedését lehet elérni az olyan természetes kivonatokban előforduló anyagokkal, melyeket az élesztőből vagy a malátából nyerünk. A Polyporus versicolor gombafajnál azt tapasztalták, hogy azok az anyagok, mint pl. a 2,4-dinitrofenol, amelyek lekapcsolják az oxidatív foszforiláláció folyamatát, tápoldatba juttatásuk után, elősegíthetik a lakkáz képződést. Hasonló hatást fejt ki a pentaklórfenol is. Az idézett eredményekből kiindulva elérkeztünk a Fomes fomentarius, 191. törzs által elősegített polifenol oxidáz képződés kérdésének megoldásához. Jóllehet ez a gombafaj megfelelő tápközegben polifenol oxidázt termel, de sokkal kisebb mennyiségben mint ami az enzimológiai kísérletekhez szükséges elkülönítéséhez szükséges lenne. Már az előzetes vizsgálatunk is azt mutatta, hogy sok ligninnel táplálkozó gombafaj akkor termel polifenol oxidázt, ha a tápoldatban nitrogénforrásként aszparagin van jelen, és szénforrásként bükk faforgácsot használnak fel. Ha szénforrásként glukózt alkalmaznak, a polifenol oxidáz termelés szempontjából elengedhetetlenül szükséges bükk faforgács kivonat hozzáadása, ami nézetünk szerint bizonyos mennyiségben olyan aromás anyagokat tartalmaz, melyek ösztönzik a polifenol oxidáz keletkezését. Az ezen anyagok által kiváltott ösztönző hatás nem növeli a polifenol oxidáz létrejöttét annyira nyilvánvalóan, hogy a polifenol oxidáz kinyeréséhez szükséges szeparációs módszerek gyanánt lehetne azokat alkalmazni.
Ezt a kérdést induktorok segítségével próbáltuk megoldani. Ezekből a vizsgálatokból az derült ki, hogy az o-toluidin, valamint a 2,6-xilidin indukciós hatása abban az esetben mutatkozik meg, ha a Fomes fomentarius (191. törzs) gombát olyan táptalajon tenyésztjük, amely szénben és nitrogénben gazdag és nyomelemeket is tartalmaz. Ebben az esetben a fenti induktorok hozzáadása után gyorsan jelentősen növekedni kezd a polifenol oxidáz képződés, maximumát a tenyésztés 14. napján éri el. Ezután csökkenni kezd a polifenol oxidáz képződés, és a 21. napon a polifenol oxidáz szintje megközelíti a kontroll tápoldat polifenol oxidáz szintjét. Az eredmények azt mutatják, hogy azokból a tápoldatokból sikerült viszonylag jól elkülöníteni a polifenol oxidázt, amelyekben a polifenol oxidáz induktora az o-toluidin volt. Az eddigi eredményekből azt a következtetést vonhatjujk le, hogy az o-toluidin és a 2,6-xilidin a polifenol oxidáz megfelelő induktora Fomes fomentarius (191.törzs) gomba tenyésztése során, és ezeknek az induktoroknak segítségével a Fomes fomentarius gomba esetében viszonylag magas a polifenol oxidáz képződés. Ezt az eljárást az enzimvizsgálatokhoz szükséges polifenol oxidáz elkülönítésére is lehet használni. Az előző részben ismertetett elkülönítési eljárás során viszonylag gyorsan és tiszta formában lehet kinyerni a polifenol oxidázt. Az enzim preparátumban nem mutattak ki semmilyen más enzimet.
1. ábra
A Fomes fomentarius (191. törzs) ligninnel táplálkozó gomba ösztönző hatása a polifenol oxidáz enzim képződésére
1 – kontroll minta, 2 – polifenol oxidáz képződés, miután 10-3 M koncentrációban o-toluidint juttattunk be a tápoldatba
2. ábra
A Fomes fomentarius (191. törzs) gombafaj polifenol oxidáz termelésének összefüggése a B tápoldatra vonatkozóan
1 – kontroll minta, 2 – a polifenol oxidáz keletkezésének növekedése, miután o-toluidint juttattunk a tápoldatba, 3 – a polifenol oxidáz keletkezésének növekedése, miután 2,6-xilidint juttattunk a tápoldatba
3. ábra
A tiszta polifenol oxidáz elkülönítésének összefüggése gél kromatorgáfia és Sepfadexe G-75 oszloptöltet felhasználásával
1- a fehérjék és színezőanyagok frakciója, 2 – a tiszta polifenol oxidáz frakciója